ELISpot技术具有高灵敏度，可在单细胞水平对细胞因子或抗体分泌细胞进行检测。IFN-γ ELISpot法首次爆发于HIV疫苗研究，再次“出圈”是SARS-Cov-2研究及疫苗开发。

　　研究报道了Sana Biotechnology研发的SC291的探索性免疫分析结果。SC291依托Sana的Hypoimmune（HIP）平台，敲除MHC I/II类分子可避免T细胞识别，过表达CD47发出“别吃我”信号，抑制巨噬细胞、NK细胞攻击，旨在解决异体细胞的免疫排斥。

　　SC291源自健康供体的CD4+/CD8+ T细胞，靶向CD19，治疗B细胞介导的疾病，如B细胞淋巴瘤以及系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎等自身免疫性疾病，属于“即用型”给药。研究通过ELISpot评估患者对HIP、WT和DKO细胞的免疫反应。

　　通过斑点计数可以直观看出双敲除DKO和低免疫原性HIP的CAR-T细胞未激活T细胞，而野生型WT细胞强烈激活T细胞，并在第28天达到峰值。证实HIP CAR-T细胞不会引发免疫反应，有效逃避免疫系统的排斥反应。免疫学数据有力支持了HIP概念在避免异体排斥反应方面的可靠性。

　　因此，ELISpot技术可用于CAR-T产品开发阶段检测T细胞免疫应答功能的测试，比如IFN-γ、IL-2、TNF-α等细胞因子分泌水平评估。还可从动物模型或患者体内分离出CAR-T细胞，并用靶癌细胞重新攻击来评估细胞因子的释放，为CAR-T临床治疗评估提供数据支撑。或者将CAR-T细胞与PBMC样品一起收集，通过ELISpot与靶细胞共培养评估CAR-T细胞的功能。还可用CAR多肽池或病毒载体多肽池刺激分离的患者PBMC细胞，评估CAR或载体引起的非必要免疫原性，对CAR-T细胞安全性进行评估。

　　ELISpot即酶联免疫斑点技术（Enzyme-linked Immunospot Assay），是细胞培养技术与ELISA双抗夹心法的巧妙融合。凭借高灵敏度和单细胞分辨率，ELISpot已成为探索免疫应答机制的常用技术之一，广泛用于疫苗研发、CAR-T/NK开云官方网址开发、基因治疗研发等领域。

　　该技术基于抗原抗体结合反应，通过预包被的捕获抗体直接“捕捉”细胞分泌的靶蛋白（如细胞因子或免疫球蛋白），经酶标二抗显色形成清晰的斑点。靶蛋白来自受刺激的细胞，因此每个斑点代表一个分泌该蛋白的细胞。通过酶联免疫斑点分析仪或显微镜对这些斑点进行计数和分析。

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