前列腺癌（PCa）是男性泌尿生殖系统中最常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率在全球男性恶性肿瘤中分别位居第一和第二。尽管近年来出现了多种新的治疗方法，但现有疗法对晚期，尤其是转移性去势抵抗性前列腺癌（mCRPC）的疗效仍然非常有限。免疫检查点抑制剂（ICIs）在许多实体瘤中显示出显著疗效，但在 mCRPC 中却未取得理想的临床效果。

　　为了探索加载 OH2 的方法，研究人员尝试了电穿孔和膜挤压来加载 OH2-GFP。处理后的产物随后用于干预前列腺癌细胞。研究人员通过流式细胞术检测 GFP 表达以表征感染效率。CCK8 检测用于验证对肿瘤细胞的细胞毒性作用。结果表明，膜挤压在感染肿瘤细胞方面比电穿孔更有效。透射电子显微镜结果揭示了加载的 OH2。GM-CSF 表Kaiyun达的检测表明加载的 OH2 具有更强的感染能力。为了进一步证实病毒成功封装，研究人员进行了免疫荧光和 qPCR 检测。共聚焦显微镜证实了 Cy3 标记的 OH2（红色）与 PKH67 标记的 EVs（绿色）共定位。此外，qPCR 定量 OH2 基因组显示加载后上清液中游离病毒 DNA 显著减少，而在囊泡破裂时急剧增加，共同证实了 OH2 成功封装入 RRA-AP-EVs 中。最后，研究人员通过皮下肿瘤异种移植模型比较了静脉注射 OH2 和 -EVs 的治疗效果。结果表明，静脉注射负载的 OH2 对肿瘤的控制效果更佳。研究人员还进行了流式细胞术分析。结果表明，用 -EVs 干预后，CD8+T 细胞的比例显著增加。同时，与 T 细胞活化（CD69）和肿瘤杀伤功能相关的指标，包括穿孔素、IFN-γ、GZMB 和 TNF-α，均显著增加。为了分析这种治疗策略诱导的免疫记忆，研究人员进行了肿瘤再攻击实验。结果证实，OH2 递送系统在小鼠体内引发了强烈的免疫记忆反应，并提供了长期的肿瘤复发防护。

　　总之，本研究加深了研究人员对溶瘤病毒与肿瘤免疫微环境相互作用的理解，并为一种新型靶向递送系统提供了临床前的概念验证。本研究结果表明，该策略有可能解决现有溶瘤病毒疗法的关键局限性，例如需要瘤内注射以及联合免疫检查点阻断带来的全身毒性。然而，其临床可行性，特别是可靠全身给药和安全性方面，仍需在更高级别的模型中进一步验证。如果能成功转化，这种方法可能会为前列腺癌和其他实体瘤的免疫治疗提供新的方向。

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